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[1064] 通常は
投稿者： み 2009年07月16日(Thu) 09時30分32秒
FISHの時は丸いガラス板に細胞を生えさせて、ガラス板を12wellのマイクロプレートの中で処理するのですが、ヒト組織を扱うシミュレーションとして培養細胞（の固まり）をパラフィン包埋してFISHをやってみたいのだそうです。
うちは私以外だれもパラフィン包埋なんてやり方は知らんからなあ。。。。
[1063] そのままじゃだめ？
投稿者： に 2009年07月14日(Tue) 20時52分49秒
培養細胞なら、スライドにはっつけてそのままin situに持って行った方が簡単な気がしますが。専用のチャンバーも便利なのが色々あった様に思います。
でも、細胞を切らなきゃいけない様な理由があるのですか。
もっとも、良い先生が身近にいるのだから、釈迦に説法か。
何だかとっても難しそうですね。
[1062] サンプルは
投稿者： み 2009年07月14日(Tue) 17時56分46秒
培養細胞なのです。
培養細胞を遠心で集めてペレットになったものを、サージカルテープでつつんでパラフィンに包埋しようと思っています。
あ、サージカルテープもRNase freeで使わないとだめですね。
ちょっと前までRNase freeのためにDEPC水を作っていましたが、最近バイオパックフィルターが導入されたので、とても便利になりました。
[1061] 一応分けてます
投稿者： に 2009年07月14日(Tue) 09時45分14秒
器具はオッケーだと思います。
水が無いorロウに埋まっている状態だとRNaseも殆ど働かないと予想してますが、水和してからハイブリまでが一番気を使っています。薬品はRNase freeしていますが、まあ、有機溶剤はソレホド気を使ってはいません。色んな人が使うので、一応、分けていますが。
そちらのサンプルが何か判らないので一概に言えませんが、ホールマウントで染色してから切片にするときもあります。
[1060] Re:良いことですが
投稿者： み 2009年07月13日(Mon) 12時21分48秒
>自分は凍結切片ですが、切片をPBSで洗浄した後ProteaseKで処理して、PFAで固定するまでは（PFAで変性するのを期待して）割と気楽ですが、その後は気を使っています。ハイブリまでの過程は必ずRNase freeの溶液を使用しています。ハイブリしてしまえば、二本鎖なら安定だし。それに、奇麗に仕上げるにはハイブリ後にRNase使いますよね。それで、RNaseはなかなか分解しないので、染色壷は専用のを分けて使っています。
私も普段の培養細胞のFISHでは、ハイブリまでRNase freeで作業していてうまくいっていますが、パラフィン切片だと、切片ブロック作って切片ができあがるところまでが問題みたいですね。水はすべてBiopack H2O、染色つぼは感熱滅菌、でOKかな？EtOH, BtOH, パラフィンも未開封のを買って専用で使うべきでしょうか。
>それは後者ですね。多分。私も忙しい最中に歯が痛くなって渋々行ったら、知覚過敏と診断されて、一ヶ月くらい治療しました。
まだまだもわんもわんと痛さの一歩手前みたいな違和感があったりしてどうもすっきりしないので、時々鎮痛剤飲んでます。治るまで当分かかりそうです。（´・ω・`）
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